1. 該模型鑒定和評(píng)價(jià)的技術(shù)方法和指標(biāo)體系，符合潰瘍性結(jié)腸炎的病理特點(diǎn)，尤其與潰瘍性結(jié)腸炎反復(fù)發(fā)作、遷延不愈的臨床特點(diǎn)高度相似。

（1） 疾病活動(dòng)指數(shù)

（2） 結(jié)腸指數(shù)

（3） 結(jié)腸組織大體評(píng)分

（4） HE 染色病理觀察

（5） MPO 酶活性檢測(cè)

2. 與國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有模型的異同

現(xiàn)有的潰瘍性結(jié)腸炎的造模方法有單一化學(xué)法刺激、免疫法、免疫復(fù)合法、基因修飾法。雖然現(xiàn)在建造UC動(dòng)物模型的方法多種多樣，但是依舊存在著或多或少的缺陷。理想模型要簡(jiǎn)單易操作，同時(shí)盡可能全面、準(zhǔn)確的模擬人類UC的病理生理學(xué)特點(diǎn)和表現(xiàn)，既要與自發(fā)的炎癥誘因相近，又要符合腸道炎癥進(jìn)展、組織損傷進(jìn)展等，同時(shí)模型病變盡量維持較長(zhǎng)時(shí)間，能盡量反映慢性病變的過(guò)程和特點(diǎn)，以滿足實(shí)驗(yàn)的需求。而目前尚缺乏能滿足這些要求的模型，且已有模型以急性損傷模型為主。故亟待尋找更好的，具有良好重復(fù)性、穩(wěn)定性，并且操作簡(jiǎn)單的動(dòng)物模型，從而為研究UC發(fā)病機(jī)制、研發(fā)治療新藥物提供良好的基礎(chǔ)。

3. 本研究的主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)或技術(shù)關(guān)鍵

3.1 創(chuàng)新點(diǎn)

本模型采用誘導(dǎo)劑聯(lián)用的方法，建立慢性、炎癥維持時(shí)間長(zhǎng)且病程穩(wěn)定的小鼠慢性 UC 造模方法。該模型改進(jìn)了傳統(tǒng)潰瘍性結(jié)腸炎模型的病程短、穩(wěn)定性差、模型指標(biāo)缺少特異性等問(wèn)題，更大程度的模擬了臨床慢性潰瘍性結(jié)腸炎病理指標(biāo)。

3.2 關(guān)鍵技術(shù)

采用噁唑酮和2,4,6-三硝基苯磺酸兩種誘導(dǎo)劑聯(lián)用、致敏與感染相結(jié)合的方法，建立了新慢性、炎癥維持時(shí)間長(zhǎng)且病程穩(wěn)定的小鼠慢性 UC 模型方法。

4. 可行性分析

4.1 前期摸索研究充分，通過(guò)閱讀大量中外文獻(xiàn)，較充分的了解潰瘍性結(jié)腸炎疾病以及模型建立過(guò)程中的問(wèn)題。

4.2 實(shí)驗(yàn)單位具備動(dòng)物飼養(yǎng)許可證以及較先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)器材和檢測(cè)設(shè)備。

4.3 通過(guò)閱讀大量中外文獻(xiàn)和走訪調(diào)研，噁唑酮和三硝基苯磺酸在臨床上應(yīng)用廣泛，效果明顯，具有可行性。

本實(shí)驗(yàn)采用昆明種6-8周齡的健康成年小鼠，體重均在33±2g，SPF級(jí)。飼料墊料均為高壓滅菌產(chǎn)品，購(gòu)自北京斯貝福生物科技股份有限公司，動(dòng)物用水為實(shí)驗(yàn)室制UP水經(jīng)過(guò)除菌處理。飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)操作均于具有檢驗(yàn)合格資質(zhì)的SPF級(jí)屏障動(dòng)物室內(nèi)進(jìn)行，并且實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以完整的包裝直接進(jìn)入屏障實(shí)驗(yàn)室，觀察室適應(yīng)7天后無(wú)異常情況，方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所有實(shí)驗(yàn)中小鼠均引頸處死，盡量減少動(dòng)物手術(shù)創(chuàng)傷程度及失血量。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物操作均符合動(dòng)物倫理學(xué)規(guī)范，對(duì)環(huán)境和生態(tài)影響等符合國(guó)家相關(guān)法律規(guī)定。

1. 胰腺病理切片

C57BL/6J小鼠，每小時(shí)腹腔注射雨蛙肽50ug/kg,分7次注射，24h后處死動(dòng)物。胰腺腺泡細(xì)胞廣泛萎縮、壞死，胰腺小葉間隙增寬。

2. 血清淀粉酶情況

C57BL/6J小鼠，每小時(shí)腹腔注射雨蛙肽50ug/kg,分7次注射，24h后處死動(dòng)物。腹腔靜脈取血，1500r/min，10min，4℃離心，取血清行淀粉酶檢測(cè)。

3、炎細(xì)胞浸潤(rùn)情況

C57BL/6J小鼠，每小時(shí)腹腔注射雨蛙肽50ug/kg,分7次注射，24h后處死動(dòng)物。取胰腺組織，用10%福爾馬林溶液浸泡48h，隨后制成石蠟切片，行免疫組織化學(xué)檢測(cè)。

4、胰腺組織炎癥因子表達(dá)

C57BL/6J小鼠，每小時(shí)腹腔注射雨蛙肽50ug/kg,分7次注射，24h后處死動(dòng)物。

1.C57BL/6J 小鼠，名稱：CBL|6J，近交系（Inbred Rat）

品系來(lái)源 ：1921年 C.C.Little用 Lathrop小鼠作近親培育時(shí)，用No7雄鼠和No.52雌鼠交配，培育成C57。在C57中將毛色呈黑色的進(jìn)行固定，培育成C57BL。1937年Ltle將維持的C57BL第六組亞系定名為C57BL6，將第十組亞系定名為C57BL10，繼而分別維持至今。1947年從 Little引入到美國(guó) Jackson Lab，形成C57BL/6J:1951年從 Jackson Lab將第32代引入到NH，形成c57BL6N亞系；1974年 Charles River從NH引入并于1975年進(jìn)行了剖腹產(chǎn)。六十年代從 Jackson Lab引入到日本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中央研究所,1986年自日本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中央研究所引入到中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。2001年中國(guó)北京維通利華從美國(guó) Charles River引入第59代核心群。

2.雨蛙肽誘導(dǎo)對(duì)照小鼠模型C57BL/6J 小鼠，名稱：C57BL/6J 小鼠

?同類系（Consomic Rat）

3.誘導(dǎo)方法：小鼠年齡6-8w，雨蛙肽每隔一小時(shí)分7次腹腔注射，每次劑量為50ug/kg(溶于200ul，0.9%生理鹽水中)，24h后處死動(dòng)物。取血清檢測(cè)淀粉酶、炎癥因子等表達(dá)水平，胰腺組織行組織病理學(xué)檢測(cè)。

急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)是胰腺通過(guò)各種機(jī)制產(chǎn)生的消化性酶和應(yīng)激信號(hào)之間存在不平衡時(shí)，導(dǎo)致的胰腺自身消化及周圍組織炎癥反應(yīng)。AP的初始癥狀包括持續(xù)性和復(fù)發(fā)性腹痛，以及發(fā)熱伴急性炎癥反應(yīng)，分為急性輕型胰腺炎和急性重型胰腺炎[1]。急性胰腺炎始于輕度不適，導(dǎo)致嚴(yán)重的器官功能障礙慢性發(fā)作，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)急性重型胰腺炎，其死亡率高達(dá)20%-30%，其治療主要是應(yīng)用抑制炎性反應(yīng)的藥物，來(lái)降低其死亡率[2]。急性重型胰腺炎時(shí)極易出現(xiàn)多器官功能衰竭，包括呼吸系統(tǒng)和心血管衰竭[3]。

AP早期的病理改變?yōu)橐认偻夥置诩?xì)胞的破壞，各種炎癥細(xì)胞和炎癥因子廣泛產(chǎn)生，導(dǎo)致炎癥瀑布級(jí)聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生，其機(jī)制尚未完全闡明。胰腺外分泌腺泡細(xì)胞在消化酶的產(chǎn)生，分泌和調(diào)節(jié)中發(fā)揮指揮作用。由胰腺外分泌細(xì)胞分泌的酶原，在十二指腸中被激活，這些強(qiáng)力的消化酶有助于消化脂肪、蛋白質(zhì)和碳水化合物[4]。胰腺炎的嚴(yán)重程度取決于活化的炎癥介質(zhì)的數(shù)量，白細(xì)胞介素-6(IL-6)，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，活化B細(xì)胞核因子κ-輕鏈增強(qiáng)子(NF-κB)，半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)，p53，趨化因子和細(xì)胞因子[5]。胰腺炎也由胰腺中絲裂原活化蛋白(MAP)激酶途徑和線粒體膜轉(zhuǎn)換孔開放的激活報(bào)道[6]。